最新医療コラム

【目的】新興入浴施設が全国的に広がり、これら循環式浴槽水中のレジオネラ属菌によるレジオネラ肺炎の集団発生が問題となっている。レジオネラ属菌は、現在49 菌種以上が知られており、多くの菌種がレジオネラ症の原因となる可能性が指摘されている。
環境水中のレジオネラ属菌の検出方法は培養法が主であるが、分離〜同定までに5〜7 日を要する。今回、私共は新たに開発された二つの迅速検出キット「Cycleave PCR Legionella Detection kit 」および「Bed-Side ICAN Legionella Detection kit」（いずれもタカラバイオ）を用い、環境水中のレジオネラ属菌DNA（5SrRNA）の迅速検出および培養法との相関を検討した。

【対象と方法】民間入浴施設などから採取した浴槽水サンプルおよびビルなどの冷却塔水サンプルを用いた。遠心濃縮後DNA 抽出し、Cycleave PCR 法およびBed-Side ICAN 法の感度、特異性を培養法と比較検討した。また、L.pneumophila SG1 株の希釈系列およびゲノムDNAを用い、検出限界および再現性を検討した。

【結果】Cycleave PCR 法では、培養法をレファレンスとし、ROC曲線によるカットオフCt（Threshold Cycle）値の検討により、感度100％、特異度71％ と良好な結果が得られた。また、L.pneumophila SG1 株の希釈系列を用いた検討では、10CFU／ assay が検出限界であった。またBed-Side ICAN 法でも同様の結果が得られた。

【まとめ】二法とも、高感度ゆえに培養法検出限界以下の検体で陽性率が高い傾向にあったが、培養法陽性検体（10CFU 以上）はすべて陽性であった。また、L.pneumophila SG1 ゲノムDNA を用いた検討では、高感度で安定した性能を示した。
なお本キットは、臨床的に重要なL.ｐneumophila のmip 遺伝子および増幅阻害確認のための内部コントロールをマルチチャンネルで同時検出でき、L.pneumophila 種の同定および偽陰性の確認がシングルチューブで可能であり、極めて有用であった。測定時間は、Cycleave PCR 法で検体前処理から検出まで約3時間、Bed-Side ICAN 法で約2時間と従来法に比べ、非常に迅速・簡便に判定しえた。培養法のみではレジオネラに対する対策の遅れや、対策後における営業再開の遅れを招く恐れがある。
これら遺伝子検査法は死菌やVNC の検討も必要であるが、1 日以内に結果が得られ、培養法を補う意味でレジオネラ属菌の迅速一次スクリーニングに利用できると考えられた。